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如何才能用好安捷伦色谱柱这件事确实值得好好学习

浏览次数:862发布日期:2022-07-21
  安捷伦色谱柱的正确使用和维护非常重要,稍有不慎就会降低色谱柱效率,缩短使用寿命,甚至损坏色谱柱。在色谱操作过程中,为了维护色谱柱,需要注意以下几个问题。
  
  1、避免压力和温度的急剧变化以及任何机械振动。温度的突然变化或色谱柱从高处坠落都会影响柱内的填充情况;柱压的突然升高或降低也会对柱内的填料产生冲击,因此应缓慢调节流速,进样时阀门转动不宜过慢。
  
  2、溶剂的组成应逐渐改变,尤其是反相色谱。不应直接由有机溶剂改为全水,反之亦然。
  
  3、一般来说,色谱柱不能反冲。只有在生产厂家表明可以反冲的情况下,才能通过反冲去除残留在柱头的杂质。否则,反冲会迅速降低柱效。
  
  4、选择使用合适的流动相(尤其是pH),避免破坏固定相。有时可以在进样器前面连接一个预柱。分析柱为键合硅胶时,前置柱为硅胶,可以使流动相在进入分析柱前被硅胶“饱和”,避免硅胶基质在分析柱中溶解。
 
  

安捷伦色谱柱
 

 

  5、避免将基质复杂的样品,尤其是生物样品直接注入色谱柱。需要对样品进行预处理或在进样器和色谱柱之间连接保护柱。保护柱通常是填充有类似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
  
  6、经常用强溶剂清洗色谱柱,以除去柱内残留的杂质。清洗时,对流路径系统中流动相的更换应逐渐用可混溶的溶剂转移,每个流动相的体积应为柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。
  
  7、色谱柱存放时,用乙腈或甲醇填充色谱柱,并拧紧色谱柱接头,防止溶剂挥发干燥。不要将缓冲溶液留在柱子中过夜或更长时间。
  
  8、色谱柱在使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结过滤器堵塞。此时应更换或拆下过滤器进行清洗;另一种可能是大分子进入柱子,污染柱头;如果柱效降低或色谱峰变形,柱头可能会塌陷,死体积可能会增加。
  
  一般安捷伦色谱柱在正确使用的情况下,使用寿命可达2年以上。硅胶基填料只能在ph2~9范围内使用。柱子使用一段时间后,一些吸附力强的物质可能会残留在柱子顶部,尤其是一些有色物质更容易被看到吸附在柱子顶部的填料上。新色谱柱使用一段时间后,柱顶填料可能会塌陷,降低柱效。这时也可以加入填料来恢复柱效。
  
  安捷伦色谱柱每次工作后,最好用洗脱能力强的洗脱液清洗。例如,ODS柱应用甲醇清洗至基线平衡。当使用盐缓冲溶液作为流动相时,应在使用后用无盐流动相清洗。含有卤素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不应长时间接触。如果安装在HPLC仪器上的色谱柱不经常使用,应每4-5天打开并清洗15分钟。
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